METODO DE CONCENTRACION POR SEDIMENTACIÓN RITCHIE

Fundamento:

La concentración de huevos, larvas y quistes en heces ha llegado a ser un procedimiento de rutina como parte de un examen completo para la detección de los parásitos intestinales y se puede realizar como complemento del examen directo.
Los procedimientos de concentración permiten la detección de protozoos y/o helmintos empleándose dos métodos: de sedimentación y flotación, o una combinación de ambos, para separar los protozoos y los huevos de helmintos de las heces, utilizando las diferencias en el peso específico.
Se deben emplear cuando la cantidad de muestra fuera pequeña, en un control de tratamiento o cuando se deba transportar poca cantidad de muestra a un lugar distante.

Concentración por Sedimentación

Los parásitos se concentran por acción de la gravedad, suspendiendo las heces en agua corriente, agua destilada o solución salina y dejando que sedimenten naturalmente o por centrifugación. Estos métodos son principalmente útiles para la concentración de quistes, o quistes y huevos.

Ventajas: es fácil de realizar, no requiere observación microscópica inmediata y se puede aplicar a la concentración de la mayoría de los parásitos intestinales.

Desventajas: la observación microscópica puede dificultarse por concentración de elementos
No parasitarios.

Existen varios métodos de sedimentación:

a) Sedimentación espontánea: método de sedimentación sencilla método de sedimentación simple de Lumbreras método de Baermann- Moraes
b) Sedimentación por centrifugación: método de Charles- Batherlemy método de formol-éter o Ritchie método de Acetato de Etilo (macro y micro técnica)

Se basa en la concentración mediante la centrifugación, con ayuda de formol y éter para separar y visualizar los elementos parasitarios.

Unas ventajas que tiene este método es concentrar y no deformar las formas parasitarias, permite el transporte y almacenamiento de material fecal procesada antes de ser examinada, se usa cuando se necesita una técnica para evaluación de tratamiento y determinación de frecuencia.

Material Y EQUIPO:

Centrifuga                                         

Tubos de Ensaye cónicos de 15 ml.                                                     Soluc. Salina isotónica

Gasa cortada en cuadros                                                                       Soluc. De formaldehido al 100%

Embudos de polietileno                                                                          éter          

Vasos de precipitado de 50ml

Aplicadores de madera

Pipetas Pasteur con bulbo

Portaobjetos de 26x76mm

Cubreobjetos de 22x22mm

Microscopio

METODO

1. Con el aplicador de madera se coloca aproximadamente1gr. De la materia fecal en el vaso de precipitado, se añade 10ml de solución salina y se homogeniza.  Nuestra muestra biológica tenía un olor fétido, de color café claro, no tenía ninguna anomalía, parecía de una persona sana.

2.      Se filtra la suspensión a través de la gasa colocada en el embudo, recogiendo el filtro en el tubo cónico. Se puede poner  los tubos de las dos muestras iguales para después

3.      Se centrifuga la suspensión durante 2 minutos a 2000 rpm. Se decanta al sobrenadante y resuspende el sedimento con solución salina centrifugando, decantando y resuspendiendo 2 veces más. Para esto nosotros debemos tener mucho cuidado con la tapa del tubo cónico, porque puede botaren la centrifuga y se extiende todo en contenido.

4.      Al último sedimento se le agrega 10ml de solución de formaldehidos al 10% se mezcla y se deja reposar durante 10min.

5.      Se añade después 5ml de éter, se tapan los tubos con tapones de caucho y se agitan enérgicamente durante 30 segundos.

6.      Se centrifuga durante 2 minutos a 2000rmp.

7.      Después de centrifugarse observan 4 capas:

                 a) Éter en la superficial

                 b) Un tapón de restos fecales

                c) Formaldehido

8.       Sedimentos en el fondo del tubo, conteniendo los elementos parasitarios.   Parece un arcoíris muy bonito.                  

9.      Se decanta el sobrenadante

10.  Se induce la pipeta Pasteur hasta el sedimento, se extrae con cuidado una gota de sedimento y se coloca en un portaobjetos.

11.  Se le añade una gota de Lugol y con uno de los ángulos del cubreobjetos, se homogeniza, cubriéndolo con el mismo.

12.  Se observa la preparación en el mismo microscopio con objetivo de 10x y 40x.

OBSERVACIONES

Se observo en esta muestra con el objetivo  general no se encontraron nada interesante.

Frotis núm. uno

OBJETIVO  10%

Se observaron  pedazos DE COMIDA PERO NADA DE IMPORTANCIA, ALGUNAS GRASAS, CRISTALES DE ACIDO, ALGUNAS FIBRAS MUSCULARES.

OBJETIVO40%

Pues solo se logro confirmar que eran grasas.

Frotis numero 2

OBJETIVO General

La muestra  casi no tenia cosas interesantes, igual que la otra, se debe a que el paciente tiene una buena higiene y casi no come en la calle.

OBJETIVO SECO DEVIL

La muestra tenía una serie de cristales de ácidos grasos, algunas células de almidón, parecida a una entamoeba coli pero con la diferencia en la pared celular.

OBJETIVO SECO FUERTE

Se comprobó que no eran de almidón por que tenían muchas aglutinaciones en el centro, como masas.

CONCLUSIÓN

Se concluyo que esta práctica tuvo el fin de aprender y observar material fecal microscópico y dar a conocer que es lo que había en las heces de los pacientes enfermo  que viene a unos estudios de parasitos,para que lo puedan tratar si esta enfermo o si está bien poder descartar esta posibilidad.

Esta práctica se vasa en  la propiedad de la densidad de los huevecillos de los protozoos en la muestra, recolectada y destruida.

Se funciona con la técnica de faust para matar y colorearlos e identificarlos, es como el completo de esta técnica para poder dar resultados más exactos con esta técnica.